马铃薯块茎颗粒结合型淀粉合酶基因的克隆及其RNAi载体的构建

• 作者: 余斌 刘玉汇 张俊莲 李元铭 杨宏羽 王丽 王蒂
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 马铃薯 颗粒结合型淀粉合酶 基因克隆 序列分析 RNAi载体
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1187-1195
• 分类号: S435.32
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2012.01187

摘要

GBSSI是马铃薯块茎中控制直链淀粉合成的关键酶,为培育高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的转基因马铃薯材料,根据GenBank登录号X58453的序列设计特异引物,采用RT-PCR技术获得马铃薯块茎GBSSI相似基因,并利用生物信息学相关软件分析,预测GBSSI相似基因cDNA序列编码的蛋白质结构和功能.结果表明,克隆的GBSI相似基因与报道的GBSSI基因序列相似性达到99.78％,其开放阅读框长1 824 bp,编码607个氨基酸,具有许多重要功能位点.三级结构预测结果表明,该蛋白具有淀粉合成功能,基因序列已注册到GenBank,序列登录号为EU403426.以此基因CDS内542 bp的靶标序列作为干扰区段,扩增GBSSI的正反向基因片段,并引入237 bp的内含子序列,构建由Patatin启动子驱动的具有“正义基因片段gbss A-内含子VPI-ABI3-like protein-反义基因片段gbss B”的植物干扰表达载体pBI121g-PgABI.本研究结果将为淀粉合成的进一步研究和高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的马铃薯品种的培育奠定基础.