H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶

• 作者: 吴德峰 宠海 范克伟 陈吉龙 黄志勇
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 流感病毒H5N1 PB1_P 克隆 表达纯化 蛋白结晶
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 31-36
• 分类号: S811.6
• 字数: 3851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2012.02.007

摘要

根据GenBank中H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒的PB1_P基因,克隆到原核表达载体pET-28a载体中,经PCR、酶切和测序分析后,鉴定出阳性重组子.将阳性质粒pET-28a/PB1_P转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5mol/L IPTG,在37℃诱导表达4h,经SDS-PAGE和Western-blot检测,获得重组蛋白PB1_P表达.并经Ni-NTA柱亲和层析与柱层析纯化表达蛋白,采用悬滴气相扩散法对纯化蛋白进行结晶.结果成功构建pET-28a/PB1_P重组质粒,SDS-PAGE结果显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,Western-blot证明表达的融合蛋白具有良好的免疫原性,经蛋白纯化、初筛结晶,得到PB1 _P重组蛋白初筛晶体,为深入研究流感病毒聚合酶的生物学功能、开发新型H5N1亚型禽流感病毒检测试剂盒奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴德峰	福建农林大学动物科学学院	90	1141	17.0	30.0
2	陈吉龙	中国科学院微生物研究所	22	112	6.0	10.0
3	范克伟	福建农林大学生命科学学院	4	27	3.0	4.0
4	宠海	清华大学医学院	1	0	0.0	0.0
5	黄志勇	福建农林大学动物科学学院	1	0	0.0	0.0