罗非鱼无乳链球菌Sip基因的克隆、表达及免疫原性分析

• 作者: 卢迈新 可小丽 叶星 田园园 迟妍妍 黎炯
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 罗非鱼 无乳链球菌 表面免疫原性蛋白 原核表达 免疫原性 抗体 相对保护率
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 页码范围: 626-633
• 分类号: Q786
• 字数: 5540字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1035.2012.00626

摘要

表面免疫原性蛋白(Surface Immunogenic Protein,Sip)是B群链球菌(Group BStreptococcus,GBS)的一种表面蛋白,在GBS多种血清型的菌株中均有表达.研究从实验室分离到的罗非鱼无乳链球菌广东株的基因组DNA中扩增出Sip基因,构建原核表达载体pColdII-Sip,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)菌株.经诱导表达、SDS-PAGE电泳检测显示重组蛋白主要以可溶形式表达.重组蛋白用亲和层析的方法纯化,蛋白纯度达98％.纯化后的重组蛋白免疫罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)以分析其免疫原性.受免鱼免疫14d后进行人工攻毒试验,免疫组的相对保护率为70％-87％.酶联免疫吸附试验(Elisa)显示受免鱼对重组蛋白产生了较好的免疫应答,免疫剂量为3 tg/g和5 μg/g时受免鱼血清抗体滴度可达1:128000.研究结果显示重组蛋白Sip具有较强的免疫原性和保护作用,Sip基因可作为罗非鱼链球菌基因工程亚单位疫苗候选基因.