重组腺病毒载体介导人LASS2基因在肝癌细胞转移中的抑制作用

• 作者: 唐宁 彭琬昕 游海燕 覃文新 邵根宝 金洁 龚爱华
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤,实验性 肿瘤转移 腺病毒,人 LASS2基因
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 244-250
• 分类号: R735.7
• 字数: 6671字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1109-0721.2012.04.004

摘要

目的:探讨人源性长寿保障基因(homo-sapiens longevity assurance homologue 2 of yeast LAG1,LASS2)对人肝癌HCCLM3细胞体外转移的影响及可能的作用机制.方法:构建含人LASS2基因的重组腺病毒并转染入HCCLM3细胞；采用蛋白质印迹法检测HCCLM3细胞中LASS2蛋白的表达水平；划痕实验及体外侵袭实验检测LASS2基因过表达对HCCLM3细胞在迁移和侵袭等转移能力上的改变；免疫共沉淀法验证LASS2蛋白与V-ATPase(vacuolar H+-ATPase)质子泵中的c亚基(ATP6L)在细胞内相互结合的情况；通过对细胞内外H+浓度的测定,探讨LASS2过表达对V-ATPase功能抑制的情况.结果:成功构建了含人LASS2基因的重组腺病毒,LASS2基因在HCCLM3细胞中能有效表达；LASS2过表达可使HCCLM3细胞的侵袭和迁移能力均明显下降(P＜0.01),其中侵袭能力下降达(48.3±7.6)％,穿过划痕的细胞个数从对照组的(59.00±6.87)个下降至(10.83±3.75)个；LASS2蛋白与ATP6L蛋白在HCCLM3细胞内特异性结合；LASS2过表达后,细胞内外H+浓度发生明显变化,表明V-ATPase质子泵功能受到抑制.结论:LASS2基因在HCCLM3细胞中过表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与LASS2蛋白结合ATP6L,抑制其分泌H+功能相关.