碱性木聚糖酶产生菌的筛选、XynG1-3基因克隆表达及酶学性质研究

• 作者: 刘晓光 刘逸寒 王建玲 路福平 郑宏臣 韩杨
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 短小芽孢杆菌 碱性木聚糖酶 筛选 鉴定 克隆 表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 106-113
• 页数: 8页
• 字数: 5877字
• 语种: 中文

摘要

从造纸厂周边碱性土壤中分离、筛选到一株产碱性木聚糖酶的细菌G1-3,根据形态和生理、生化特性并结合16SrDNA序列分析,鉴定菌株G1-3为短小芽孢杆菌,命名为Bacillus pumilus G1-3.利用克隆表达载体pET-22b(+),实现了Bacillus pumilus G1-3碱性木聚糖酶基因XynG1-3在E.coli BL21中的表达.经氨基酸序列分析,木聚糖酶XynGl-3属于GH11家族的小分子木聚糖酶.重组木聚糖酶XynG1-3经镍离子亲和层析一步纯化后,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测其分子量为24 kD.对酶学性质进行分析,重组酶XynG1-3最适作用温度为55℃,最适作用pH为8.0；该酶在60℃保温1h,残余酶活保持为原来的56％,pH作用范围较广,在pH10.0下保存1h,残余酶活仍能保持75％,为耐碱性木聚糖酶.