人乳头瘤病毒假病毒体外感染模型的建立及人α防御素5抗病毒作用

• 作者: 王军平 王艾平 申明强 程天民 粟永萍 耿放 陈芳 陈默
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒 假病毒 防御素 绿色荧光蛋白 抗病毒作用
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 473-476
• 分类号: R373|R394-33|R978.7
• 语种: 中文

摘要

目的 建立用人乳头瘤病毒16亚型假病毒(HPV-16 Psv)感染官颈癌细胞模型,并研究3种不同构型人α防御素5(HD-5)抗HPV的作用.方法 将表达HPV-16假病毒衣壳蛋白的重组质粒p16L1L2和含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒Pfwb共转染293FT细胞,分离、纯化病毒颗粒后感染官颈癌细胞株C-33a,同时分别给予20 μg/ml的HD-5/N(天然构型)、HD-5/Acm(半胱氨酸被Acm修饰)或HD-5/Abu(半胱氨酸被Abu替换)处理,培养48 h后荧光显微镜观察和流式细胞分析病毒感染率.结果 Pfwb与P16L1L2成功转染293FT细胞并获得滴度达2.5×108TU/ml的HPV-16假病毒液,镜检和流式细胞术检测显示官颈癌细胞C-33a能够被假病毒感染并表达GFP.HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/Abu对HPV-16感染C-33a细胞的抑制率分别为(96.48±5.67)％、(69.02±7.88)％和(2.71±1.53)％.与HD-5/N相比,HD-5/Acm和HD-5/Abu的抗病毒作用显著降低(P＜0.01).结论 建立了基于流式细胞分析的HPV-16假病毒感染模型并将其用于抗病毒药物活性检测.发现HD-5的空间结构和分子中半胱氨酸对其抗HPV感染的活性有重要作用.