小环载体介导的siRNA稳定抑制乙肝病毒的复制和表达

• 作者: 冯涛 刘晓曼 杨倬
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小环载体 乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV) RNA干扰 Huh-7细胞
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传和分子生物学
• 页码范围: 191-197
• 分类号: Q933
• 语种: 中文

摘要

[目的]尝试构建表达小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)的小环载体,并初步鉴定其对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)复制及其基因表达的抑制作用.[方法]设计并合成靶向HBV S区的siRNA,将其克隆到小环载体pMC.BESPX-MCS2上,测序正确后将重组体pMC-H1 -siHBS-U6转化入感受态E.coli ZYCY10P3S2T,然后在培养基中加入L-阿拉伯糖,诱导其降解细菌骨架,获取只含有目的基因表达盒的小环RNA干扰载体pmc-H1 -siHBS-U6.将小环RNA干扰载体与HBV真核表达质粒pHBV1.3共转染Huh-7细胞,分别在转染后1-7天,ELISA法检测Huh-7细胞上清中的HBsAg、HBeAg,并且通过Real-time RT-PCR法分析干扰RNA对HBV DNA及mRNA的抑制效果.[结果]成功构建了靶向HBV S基因的siRNA小环表达载体pmc-H1-siHBS-U6.该载体能显著抑制Huh-7细胞HBsAg和HBeAg分泌,并且其抑制效果能够维持2-3周时间.Real-time PCR证实HBV的DNA与mRNA水平分别降低了71％和80％,而对照siRNA及空载体则无此作用.[结论]成功构建了靶向HBV的小环RNA干扰载体,并且其能稳定、高效、特异地抑制HBV基因的表达与复制,该研究不仅对探索HBV的基因治疗提供了重要线索,而且为RNA干扰的应用提供了新的运载体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯涛	重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室	60	230	8.0	11.0
2	刘晓曼	重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室	1	5	1.0	1.0
3	杨倬	清华大学生命科学学院	1	5	1.0	1.0