布鲁氏菌2308ery基因启动子缺失株的构建及鉴定

• 作者: 孟仁 张辉 李瑞芳 王远志 郭飞 陈创夫 鲁芝子
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 布鲁氏菌 ery 基因敲出 基因缺失株 反转录PCR
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-13
• 分类号: Q789
• 字数: 2754字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2012.02.030

摘要

目的:构建布鲁氏菌2308株ery基因启动子缺失株.方法:用PCR方法从亲本株2308上扩增ery基因启动子侧翼序列,将该片段与pMD19 -T连接,亚克隆为自杀载体pGEM - 7zf - △ery - sacB.将自杀载体电转化布鲁氏菌感受态细胞中经同源重组后,分别用100 mg/L氨苄和7％蔗糖筛选.对获得的基因缺失株进行RT - PCR鉴定和遗传稳定性检测.结果:成功获得ery基因启动子缺失株,2308△ery基因启动子缺失株未扩增出eryA基因.并且该缺失株在10代以内未发生回复突变.结论:成功构建2308△ery基因启动子缺失株,为研究布鲁氏菌的毒力基因及其流产机制奠定基础.