带有突变穿膜肽重组凋亡素可溶性表达的研究

• 作者: 单含文 张惠展 杨广超 汪雅雯 王焕焕 谢先文 赵健
• 来源期刊: 食品与药品
• 学科: 生物学
• 关键词: 突变HBD 可溶性表达 凋亡素
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-11
• 分类号: Q591.2
• 字数: 2834字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-979X.2012.01.003

摘要

目的 构建apoptin(凋亡素)-HBDcK-pET28a突变体重组表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3)中实现高效可溶性表达,并观察突变后穿膜肽(CPP)在HeLa细胞中的转导活性.方法 采用PCR介导突变方法将重组蛋白apoptin-HBD及EGFP-HBD的HBD结构域中的Cys (C)突变为Lys(K).突变的重组质粒在大肠杆菌BL21 (DE3)中表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,进一步观察HeLa细胞突变后HBD的转导活性.结果 经双酶切鉴定和序列分析,突变后的重组质粒apoptin-HBDcK-pET28a及EGFP-HBDcK-pET28a构建正确.转化E.coli BL21 (DE3)后,融合蛋白均获得可溶性表达.EGFP-HBDcK作用于HeLa细胞13h后,可观察到细胞内强绿色荧光.结论 HBD结构域中C突变为K,可达到融合蛋白可溶性表达的目的,且仍能保持很强的转导活性,可携带EGFP蛋白进入HeLa细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵健	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	58	146	4.0	9.0
2	王焕焕	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	3	4	2.0	2.0
3	汪雅雯	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	3	4	2.0	2.0
4	张惠展	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	65	477	9.0	20.0
5	杨广超	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	1	2	1.0	1.0