Rho相关蛋白激酶抑制剂Y-27632对猪诱导多能干细胞冻存和传代效率的影响

• 作者: 刘亚军 成德 李珍珍 王华岩 高星 高祎 鲍建昌
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: Y-27632 猪诱导多能干细胞(iPS细胞) Rho相关蛋白激酶(ROCK) 冻存 凋亡
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 726-734
• 页数: 9页
• 字数: 6123字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.07.002

摘要

猪作为重要的疾病模型动物,目前猪诱导多能干细胞(iPS细胞)已有建系,但是细胞的冻存和传代的效率较低,影响后续的实验研究.Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y-27632可提高人胚胎干细胞的解冻存活率,促进其克隆形成.本实验以猪(Sus scrofa)iPS细胞为研究对象,通过在猪iPS细胞冻存和解冻过程中添加Y-27632,发现其可以减少猪iPS细胞在冻存和解冻复苏过程中的凋亡.在细胞的传代过程中,使用Y-27632可以促进猪iPS细胞的贴壁和克隆形成.虽然高浓度Y-27632会对猪iPS克隆的形态产生一定的影响,但并未影响细胞的碱性磷酸酶(AP)活性和多能性基因Oct4、Sox2和Nanog的表达水平.最后将转座子报告质粒PB[Act-RFP]DS导入猪iPS细胞中,经流式筛选后得到的带有红色荧光的细胞,并将其注射于猪孤雌胚胎中进行发育能力检测,发现Y-27632的处理能减少细胞在流式筛选和胚胎注射中的凋亡,促进其在胚胎内的嵌合发育.研究结果说明,ROCK抑制剂Y-27632可以提高猪iPS细胞冻存和传代的效率,促进其在胚胎中的嵌合.该研究有助于猪iPS细胞及其他多能干细胞的保存,传代和筛选等相关研究.