转录因子GATA-1与人巨细胞病毒UL111A基因5'上游序列结合的实验研究

• 作者: 吕建新 宋建华 彭颖 徐志伟 李祥 浮苗 田可港 郑晓群 高艳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转录因子GATA-1 HCMV潜伏感染 UL111A
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2244-2249
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9
• 字数: 4552字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2012.12.024

摘要

目的:利用人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)潜伏及再激活感染THP-1细胞模型,研究细胞核内转录因子GATA-1与HCMV UL111A基因5上游DNA序列的相互作用.方法:采用免疫印迹(Western blotting)技术定量分析HCMV潜伏及再激活感染时细胞核内转录因子GATA-1的表达;通过MATCH工具软件分析UL111A基因5上游DNA序列,发现存在着11个GATA-1的结合位点,针对这11个GATA-1结合位点DNA序列设计9对引物,采用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)及实时荧光定量PCR技术分析转录因子GATA-1与UL111A基因5上游DNA序列的结合情况.结果:HCMV潜伏感染时UL111A基因未表达cmvIL-10,激活感染时表达cmvIL-10,潜伏感染时转录因子GATA-1的相对表达量高于激活感染;以GATA-1抗体特异性结合的DNA片段为模板,9对引物中共有5对扩增出目的条带;HCMV潜伏感染组和激活感染组5个位点转录因子GATA-1结合率分别为:-4.00±0.26、-4.50±0.33、-4.41±0.21、-3.61±0.20、-3.47±0.11和-1.13±0.07、-0.63±0.05、-1.10±0.07、-0.24±0.03和-0.14±0.01,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:HCMV感染时转录因子GATA-1可能通过与UL111A基因 5'上游序列1119(-3760)位点、107(-4772)位点、609(-4270)位点、849(-4030)位点和2047(-2832)位点结合,调节UL111A基因的转录,参与HCMV潜伏与再激活感染的过程.