靶向树突状细胞的肿瘤疫苗OVA慢病毒载体构建及其体外抗肿瘤效应

• 作者: 李浩博 李牧 杨耀琴 赵培林 陈帅 陶惠红
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 肿瘤抗原 树突状细胞 肺肿瘤细胞 肿瘤免疫治疗 基因治疗
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 13-18,23
• 分类号: R392
• 字数: 5864字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn1008-0392.2012.01.003

摘要

目的 构建靶向树突状细胞(dendritic cell,DC)的肿瘤疫苗pHR-CMV-EGFP-OVA慢病毒表达载体,并观察肿瘤抗原特异性DC激活T细胞对小鼠Lewis肺癌细胞(lewis lung carcinoma cell,LLC)的抗肿瘤效应,为肺癌的临床治疗提供实验依据.方法 以分子克隆方法构建携带模拟肿瘤抗原鸡卵清蛋白( ovalbumin,OVA)的慢病毒表达载体,经XhoⅠ及XbaⅠ双酶切后电泳和DNA测序验证；应用脂质体法三质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,转导LLC,进行单克隆化筛选培养后,经RT-PCR、Western blot检测所获得的OVA稳定表达细胞株中OVA的表达；分离纯化小鼠骨髓DC；用慢病毒感染DC；分离纯化小鼠脾T淋巴细胞；应用MLR和MTT法检测肿瘤抗原负载的DC刺激T淋巴细胞对LLC的杀伤作用.结果 (1)构建的pHR-CMV-EGFP-OVA慢病毒表达载体经酶切后电泳和DNA测序,结果显示载体构建正确；(2)获得了纯化的小鼠骨髓来源的DC；(3)获得了携带肿瘤抗原OVA的LLC和DC；(4)负载肿瘤抗原的DC刺激T淋巴细胞能有效地杀伤负载相同肿瘤抗原的LLC.结论 本研究成功地构建了携带肿瘤模拟抗原OVA的慢病毒表达载体pHR-CMV-EGFP-OVA,并成功地转导LLC与DC,获得了稳定表达OVA的肺癌细胞株和携带OVA的DC,基于肿瘤抗原靶向DC的抗肿瘤策略能有效地杀伤LLC,为靶向DC的肺癌免疫治疗提供了体外实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨耀琴	同济大学医学院组织学与胚胎学教研室	35	174	7.0	10.0
2	陶惠红	同济大学医学院组织学与胚胎学教研室	24	118	6.0	9.0
3	赵培林	同济大学医学院组织学与胚胎学教研室	7	18	2.0	4.0
4	李牧	同济大学医学院组织学与胚胎学教研室	2	11	2.0	2.0
5	李浩博	同济大学医学院组织学与胚胎学教研室	12	95	5.0	9.0
6	陈帅	同济大学医学院组织学与胚胎学教研室	8	110	5.0	8.0