人骨髓间充质干细胞生物学特性及腺病毒介导的GFP标记

• 作者: 彭秀君 杨平 甘为民 石硕文 种铁 翟宇强 谭云鹤 郭子宽 陈长虹
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 间充质干细胞 分化 细胞表面标志 Ad-GFP 细胞转染 人淋巴细胞分离液(Ficoll)
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 587-592
• 分类号: R329.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2012.05.013

摘要

目的 建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分离、培养以及鉴定的方法,同时应用腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)检测细胞转染的效率.方法 应用人淋巴细胞分离液(Ficoll)对hMSCs进行分离,经贴壁纯化后用MTT法检测增殖能力;并对其成骨、成脂、成平滑肌诱导分别进行碱性磷酸酶(ALP)、油红O染色及α-SMA免疫细胞化学检测;采用流式细胞仪(FCM)检测细胞表面标志的表达.用Ad-GFP转染,并应用荧光显微镜与FCM检测转染效率.结果 hMSCs镜下为成纤维样形态,约在第4天进入对数增长期;分化诱导后ALP染色、Von kossa银染、油红O染色以及α-SMA均为阳性;FCM检测CD14、CD31、CD45表达阴性,CD44、CD73、CD106及PDGFRβ表达阳性;当感染复数MOI=200,细胞培养48 h时感染效率较高,FCM检测显示为99.81％.结论 经过对增殖、分化能力以及表面标志的分析,证明用Ficoll可以分离得到较纯的hMSCs,Ad-GFP可以很好地感染细胞,为组织工程种子细胞的体内示踪提供了途径.