新肠道病毒71型病毒样颗粒的制备

• 作者: 曹明慧 李培锋 李晓楠
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: EV71 Bac-to-Bac表达系统 病毒样颗粒
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1014-1018,1031
• 页数: 6页
• 分类号: R378.5
• 字数: 4186字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.11.012

摘要

目的:研究新肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的制备方法.方法:依据昆虫细胞偏爱密码子优化EV71 P1和EV71 3CD基因,将二者分别克隆至供体质粒pFastBac Dual多角体蛋白启动子pPh和pP10上;构建重组pFastBac Dual EV71 P1-3CD质粒,并与Bacmid质粒转座后,获得重组杆状病毒表达质粒转染至Sf9细胞,应用PCR、免疫荧光、SDS-Page和Western blot方法鉴定EV71 VLPs表达情况,最后利用蔗糖密度梯度离心的方法纯化EV71 VLPs.结果:经昆虫密码子优化的EV71 P1和EV71 3CD基因,利用Bac-to-Bac系统成功组装了EV71 VLPs,纯化EV71 VLPs的浓度为0.817 mg/ml,纯度>90%.结论:成功地构建了重组杆状病毒EV71 P1-3CD Bacmid表达质粒,并表达和纯化了 EV71 VLPs,这为今后EV71 VLPs疫苗的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李培锋	内蒙古农业大学兽医学院	124	808	15.0	21.0
2	曹明慧	中国农业大学生物学院	2	13	2.0	2.0
3	李晓楠		6	15	2.0	3.0