八色流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病微小残留病方法的建立

• 作者: 伍平 刘抗援 屈晨雪 王卉 王建中 王璐璐 邢莹 龚岩
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 流式细胞术 急性淋巴细胞白血病 肿瘤,残余
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 423-430
• 分类号: R446.1
• 字数: 6129字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.05.009

摘要

目的 建立八色流式细胞术(8c-FCM)检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留病(MRD)的方法,并进行初步验证.方法 采用CD19/侧向角散色光(SSC)、CD45/10和CD34(或cTdT)联合设门,两管八色抗体组合检测B-ALL的MRD.将B-ALL细胞株Nalm-6细胞掺入正常人骨髓细胞中,使Nalm-6细胞占有核细胞比例为10.00％、1.00％、0.10％、0.01％和0.005％,采用已建立的8c-FCM,进行回收试验和重复性试验,评价检测方法的准确度和精密度.检测抗体标记Nalm-6后保存不同时间的荧光强度变化,评价各荧光抗体的稳定性.检测并分析39份骨髓细胞免疫表型,包括对照者9例,初发或复发B-ALL患者9例,B-ALL化疗或骨髓移植(BMT)后缓解期病例21例,评价8c-FCM方法检测正常骨髓B淋巴系细胞群和B-ALL细胞的免疫表型结果,以及对B-ALL的MRD 检测结果,并探讨其与现用四色流式细胞术(4c-FCM)的可比性.结果 建立了以CD19、CD45、CD10为主的两管八色抗体组合检测MRD的方法；当掺入的细胞株占有核细胞比例≥0.10％时,变异系数(CV)＜2.5％,平均回收率为95.81％；当获取106个细胞,Nalm-6细胞比例10.00％ ～0.01％时,检测到的Nalm-6细胞占骨髓有核细胞比例与实测值呈线性相关(r=0.99,P＜0.05),该法检测骨髓中Nalm-6细胞的灵敏度达到0.01％.Nalm-6细胞株标记抗体后随时间延长略有降低,但24h内平均荧光强度减低＜10％.应用该方法检测骨髓中CD19阳性的B淋巴系细胞,对照组呈现4个连续发育阶段,可分为4期:Ⅰ期CD45low/CD10stro/CD20 -/CD38stro/CD34+或cTdT+,Ⅱ期CD45 +/CD10+/CD20-/CD38stro/CD34+或cTdT+,Ⅲ期CD45 +/CD10 +/CD20-/CD38stro/CD34 -或cTdT-,Ⅳ期CD45stro/CD10 -/CD20 +/CD38low/CD34 -或cTdT -.初发和复发B-ALL患者骨髓中白血病细胞与对照组相比,均存在抗原表达异常；8c-FCM检测B-ALL缓解组,有5例存在MRD,主要抗原表达与4c-FCM检测结果一致,5例MRD细胞的范围为0.02％～5.42％.结论 本研究所建立的两管8c-FCM新方法检测骨髓中白血病细胞的重复性好、准确度高,可鉴别骨髓正常B淋巴系细胞群、B-ALL治疗缓解后骨髓造血重建的B系前体细胞与MRD细胞群；和4c-FCM比较,两管8c-FCM新方法的标本用量少,检测速度快,能够有效诊断B-ALL的MRD.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王建中	北京大学第一医院检验科	66	632	14.0	22.0
2	王卉	北京市道培医院流式细胞室	8	46	4.0	6.0
3	屈晨雪	北京大学第一医院检验科	50	223	9.0	12.0
4	龚岩	北京大学第一医院检验科	18	59	4.0	7.0
5	邢莹	北京大学第一医院检验科	15	110	6.0	10.0
6	王璐璐	北京大学第一医院检验科	3	6	2.0	2.0
7	伍平	北京市道培医院形态室	6	12	2.0	3.0
8	刘抗援	北京军区总医院血液科	12	72	4.0	8.0