Nesprin蛋白对骨髓间充质干细胞的影响

• 作者: 朱洪生 杨文钢 汪永义 胡振雷 薛松 连锋
• 来源期刊: 中国胸心血管外科临床杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Nesprin蛋白 骨髓间充质干细胞 细胞增殖 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 408-413
• 分类号: Q813.1+1
• 字数: 5511字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建nesprin蛋白siRNA慢病毒载体(LV-siNesprin),感染骨髓间充质干细胞(MSCs),观察nesprin 蛋白对MSCs的影响. 方法 针对nesprin靶基因序列设计并合成4对miRNA oligo,并将4对oligo退火成双链DNA,测序鉴定.将4种miRNA干扰质粒(SR-1、SR-2、SR-3、SR-4)转入大鼠血管平滑肌细胞,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测干扰效应,筛选最佳干扰序列;将最佳干扰序列和pDONR221载体进行重组反应,获得含干扰序列的入门载体,再将入门载体和慢病毒表达的目的载体pLenti6/V5-DEST进行重组反应获得含干扰序列的LV-siNesprin+绿色荧光蛋白(GFP),包装慢病毒,测定病毒滴度.LV-siNesprin+ GFP转染MSCs,Western blotting鉴定比较nesprin蛋白表达情况(分为LV-siNesprin+ GFP组、GFP对照组和正常细胞组),用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核形态改变和四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MSCs感染LV-siNesprin后24 h、48 h、72h和96 h的增殖情况(分为LV-siNesprn+GFP组、GFP对照组和正常细胞组). 结果 测序证实合成的4对miRNA oligo正确,RT-PCR和Western blotting筛选出最佳干扰miRNA质粒SR-3,成功构建LV-siNesprin,包装慢病毒,病毒悬液的活性滴度为1×106 ifu/ml.LV-siNesprin转染MSCs后,nesprin蛋白表达明显下降,出现细胞核融合、核碎裂等形态学改变;MTT法检测显示,LV-siNesprin+GFP组MSCs增殖速度较GFP对照组和正常细胞组减慢. 结论 Nesprin蛋白对MSCs核膜稳定维持核膜空间结构起作用,并利于细胞增殖更新.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	连锋	上海交通大学医学院附属仁济医院心血管外科	49	97	6.0	7.0
2	朱洪生	上海交通大学医学院附属仁济医院心血管外科	15	50	4.0	6.0
3	薛松	上海交通大学医学院附属仁济医院心血管外科	121	385	9.0	14.0
4	胡振雷	上海交通大学医学院附属仁济医院心血管外科	38	114	6.0	9.0
5	汪永义	上海交通大学医学院附属仁济医院心血管外科	16	31	4.0	5.0
6	杨文钢	上海交通大学医学院附属仁济医院心血管外科	15	23	3.0	4.0