影响猪精子介导基因转移效果的因素研究

• 作者: 吴晗 周辉云 宋成义 李庆平 李碧春 毛九德 王宵燕 谢雨琇 高波
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: DNA转染剂 孵育温度 DNA形态 猪 精子
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 23-28
• 分类号: S811.6
• 字数: 4183字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2012.01.005

摘要

为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响.结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子.随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势.环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量.综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响；PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果；共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据.