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以MyD88 TIR二聚化为靶点的抗炎抑制剂筛选模型的建立
以MyD88 TIR二聚化为靶点的抗炎抑制剂筛选模型的建立
作者:
姜雪
巴雪青
曾宪录
薛嬿
赵岩
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
MyD88 TIR
二聚化
抗炎抑制剂
筛选模型
摘要:
MyD88是IL-1R/TLR受体超家族向细胞内转导胞外信号时募集到受体胞浆尾部的重要接头蛋白.由TIR结构域介导的MyD88分子同源二聚化是它招募到受体胞浆尾部的前提,然后二聚化的MyD88再募集下游信号分子,传递信号,引发促炎基因的表达.本研究旨在建立一种模型,以实现活细胞原位的、基于荧光信号变化的MyD88二聚化抑制物的高通量筛选.我们分别构建了 MyD88 TIR与GFP和RFP的融合蛋白表达质粒,瞬时转染HeLa细胞,在488nm激发光下,转染GFP-MyD88 TIR和RFP-MyD88 TIR细胞,检测到绿色荧光与红色荧光间的共振能量转移(FRET).而当细胞转染GFP-MyD88 TIR和RFP或RFP-MyD88 TIR和GFP,因TIR二聚化不能实现,FRET效率受到严重影响.实验结果提示,依赖双阳性表达GFP-MyD88 TIR和RFP-MyD88 TIR的细胞株,检测不同化合物对于荧光FRET效率的影响,可以建立MyD88 TIR二聚化抑制药物的筛选模型.此外,我们构建了原核表达质粒,利用纯化的His-MyD88 TIR分别与GST或GST-MyD88 TIR蛋白进行体外结合实验,发现GST-MyD88 TIP(而非GST)可以与His-MyD88 TIR相互结合.结果的差异性提示,利用His-MyD88 TIR和GST-MyD88 TIR体外结合实验分析,可以进一步确定抑制物是否直接阻断了TIR的相互作用.结合真核细胞的荧光FRET阻断结果和原核表达的重组蛋白相互作用分析,可确定MyD88 TIP二聚化的抑制物.利用这一模型可以对商品化的小分子库、自行制备的天然产物组分进行广泛的筛选,从中获得有效抑制MyD88二聚化的化合物,参与对MyD88信号通路依赖的慢性炎症、自身免疫性疾病的药物治疗.
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内容分析
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期刊文献
内容分析
关键词云
关键词热度
相关文献总数
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(/年)
文献信息
篇名
以MyD88 TIR二聚化为靶点的抗炎抑制剂筛选模型的建立
来源期刊
生物化学与生物物理进展
学科
关键词
MyD88 TIR
二聚化
抗炎抑制剂
筛选模型
年,卷(期)
2012,(5)
所属期刊栏目
技术与方法
研究方向
页码范围
483-490
页数
8页
分类号
字数
语种
中文
DOI
10.3724/SP.J.1206.2011.00379
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
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1
曾宪录
32
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2
赵岩
17
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3
巴雪青
7
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薛嬿
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姜雪
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传播情况
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引文网络
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参考文献
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节点文献
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二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
MyD88 TIR
二聚化
抗炎抑制剂
筛选模型
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
生物化学与生物物理进展
主办单位:
中国科学院生物物理研究所
中国生物物理学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1000-3282
CN:
11-2161/Q
开本:
大16开
出版地:
北京朝阳区大屯路15号中国科学院生物物理研究所内
邮发代号:
2-816
创刊时间:
1974
语种:
chi
出版文献量(篇)
3726
总下载数(次)
14
总被引数(次)
39155
相关基金
吉林省自然科学基金
英文译名:
官方网址:
http://kyc.nedu.edu.cn/xxcx/xmzl/sqsjddxs2.htm
项目类型:
学科类型:
期刊文献
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生物化学与生物物理进展2012年第8期
生物化学与生物物理进展2012年第7期
生物化学与生物物理进展2012年第6期
生物化学与生物物理进展2012年第5期
生物化学与生物物理进展2012年第4期
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生物化学与生物物理进展2012年第2期
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