重组hcmvIL-10的表达纯化及免疫抑制活性研究

• 作者: 冯晶晶 彭颖 曾智 浮苗 田可港 郑晓群 高艳
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人巨细胞病毒 巨细胞病毒白细胞介素10 白细胞介素10 免疫抑制
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 968-973
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 5371字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.11.002

摘要

目的:探讨重组人巨细胞病毒白细胞介素10(hcmvIL-10)对单核细胞的免疫抑制活性及分化相关基因表达的影响.方法:将重组的原核表达质粒pMal-c2X-hcmvIL-10和 pMal-c2X-hIL-10转化受体菌E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,采用Amylose-resin亲和层析纯化重组蛋白,并用葡聚糖凝胶 (Sephadex G-75)进行二次纯化.纯化的重组蛋白hcmvIL-10和人白细胞介素10(hIL-10)分别与THP-1细胞作用后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养细胞上清液TNF-α水平;实时荧光定量PCR与流式细胞术分别检测THP-1细胞HLA-DR mRNA及HLA-DR分子的表达;采用功能分类Th1-Th2-Th3 PCR ARRAY检测分化相关基因表达谱.结果:重组蛋白hcmvIL-10 和hIL-10经SDS-PAGE及Western blot鉴定与目的相符;不同浓度(2、10和50 ng/ml)重组hcmvIL-10和hIL-10分别与经PHA诱导的THP-1细胞作用48小时后,培养上清液中TNF-α的浓度分别为:(3.8±0.96)pg/ml、(1.95±0.51)pg/ml、(1.6±0.45)pg/ml和(2.49±0.43)pg/ml、(1.77±0.38)pg/ml、(0.98±0.16)pg/ml,除2 ng/ml重组hcmvIL-10处理组外,其它处理组与对照组比较均明显降低(P＜0.01);不同浓度重组hcmvIL-10和hIL-10分别与THP-1细胞作用48小时后,HLA-DR mRNA相对表达量分别为:0.86±0.025、0.76±0.023、0.75±0.017和0.73±0.017、0.61±0.017、0.55±0.015,HLA-DR分子的表达分别为:(11.5±0.44)%、(10.1±0.30)%、(9.1±0.38)%和(10.9±0.10)%、(9.7±0.50)%、(7.5±0.32)%,除2 ng/ml重组hcmvIL-10处理组外,其它处理组与对照组比较均明显降低(P＜0.01);功能分类Th1-Th2-Th3 PCR ARRAY共检测84个分化相关基因,hcmvIL-10处理组共有8个基因差异表达,上调基因为IL-12RB2、NFATC2、SOCS2、TYK2、GFI1和CEBPB,下调基因为CD80和CTLA4; hIL-10处理组共有5个基因差异表达,上调基因为SOCS2,下调基因为CD80、CD28、CTLA4和IL-6.结论:重组蛋白hcmvIL-10可抑制THP-1细胞分泌TNF-α,下调THP-1细胞HLA-DR分子的表达,类似hIL-10的免疫抑制功能;重组蛋白hcmvIL-10可影响THP-1细胞相关基因的表达,其差异表达基因与hIL-10不同.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭颖	温州医学院检验医学院生命科学学院	29	167	7.0	12.0
2	田可港		6	34	4.0	5.0
3	浮苗		4	23	3.0	4.0
4	郑晓群		47	192	8.0	10.0
5	曾智		1	1	1.0	1.0
6	高艳		2	9	1.0	2.0
7	冯晶晶		2	18	1.0	2.0