北京棒杆菌芳香族氨基酸转运蛋白基因敲除对L-色氨酸积累的影响

• 作者: 丁久元 张英姿 王宇 赵智 马温华
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 谷氨酸棒杆菌 转运蛋白 基因敲除 L-色氨酸
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 遗传和分子生物学
• 页码范围: 1344-1351
• 分类号: Q935
• 语种: 中文

摘要

[目的]为了减少北京棒杆菌PD-67(Corynebacterium pekinense PD-67)从细胞外吸收色氨酸,降低细胞内色氨酸库的浓度,从而使色氨酸的反馈控制作用减弱,增加胞外L-色氨酸的积累量,构建北京棒杆菌PD-67的芳香族氨基酸转运蛋白基因aroP敲除的菌株,研究aroP基因敲除对菌株L-色氨酸积累的影响.并进一步研究在aroP敲除菌株中表达邻氨基苯甲酸合成酶(AS)基因对L-色氨酸积累的影响.[方法]运用PCR技术扩增aroP基因,与整合质粒连接后,用限制性内切酶法构建带有内部片段缺失的aroP基因的敲除载体.利用同源重组技术,敲除北京棒杆菌PD-67的aroP基因,构建菌株PD-67 ΔaroP,并用带有aroP基因的表达载体对PD-67ΔaroP进行互补验证.采用PCR技术扩增AS基因,与表达载体连接构建重组质粒.将重组质粒转入菌株PD-67ΔaroP,构建工程菌株PD-67 ΔaroP/pXAS.通过摇瓶发酵研究PD-67 AaroP和PD-67 ΔaroP/pXAS的发酵特性.[结果]经PCR验证获得了aroP基因缺陷的菌株.摇瓶发酵结果表明,与出发菌株相比,PD-67ΔaroP的L-色氨酸的积累量提高了65％.酶活分析结果表明,AS基因在菌株PD-67 △aroP中得到表达.AS基因表达使工程菌单位菌体产酸率提高了25.6％.[结论]北京棒杆菌PD-67中芳香族氨基酸转运蛋白基因arop的敲除能够提高胞外L-色氨酸的积累量.在arop基因敲除菌中表达AS基因,可以进一步提高工程菌的产酸率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宇	中国科学院微生物研究所	211	1906	23.0	32.0
2	赵智	中国科学院微生物研究所	18	96	7.0	8.0
3	张英姿	中国科学院微生物研究所	19	119	8.0	9.0
4	丁久元	中国科学院微生物研究所	18	121	8.0	9.0
5	马温华	中国科学院微生物研究所	1	5	1.0	1.0