肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 叶青 吕立新 周俊明 张雪寒 李彬 栾晓婷 温立斌 王小敏 茅爱华 赵攀登 郭容利
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因 缺失株 小鼠 黏附
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 337-343
• 分类号: S852.61+2
• 字数: 4794字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2012.02.019

摘要

为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375 -BN-KanBC,转化SM10宿主菌获得重组SM10( pMEG375-BN-Kan-BC).将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株.用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力.经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替.O157∶H7(△toxB生长特性与亲本株相比无明显差异.O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍.口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB第3d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d；而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d.