沉默p53和p21基因延缓髓核细胞衰老退变实验研究

• 作者: 姬振伟 张涛 蔡承魁 裘秀春 贠喆 钱济先 马云雷 马保安
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 髓核细胞 低氧诱导因子1 基质金属蛋白酶2 小干扰RNA 椎间盘退行性变 大鼠
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 脊柱脊髓修复与功能重建
• 页码范围: 796-802
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

目的 髓核细胞衰老凋亡是椎间盘退行性变的病理基础,探讨髓核细胞表型分子及延缓髓核细胞衰老退变的机制.方法 原代培养8～10周龄雄性SD大鼠髓核细胞,免疫细胞化学染色鉴定髓核细胞表型分子低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、HIF-1β、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)及Ⅱ型胶原表达.小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)瞬时转染髓核细胞沉默p53、p21后行RT-PCR及Western blot 检测沉默效率,siRNA转染前后细胞衰老相关β半乳糖苷酶(senescence associated-β-galactosidase,SA-β-gal)染色检测髓核细胞衰老变化,流式细胞仪检测髓核细胞周期变化,MTT法生长曲线分析髓核细胞增殖变化.结果 免疫细胞化学染色显示髓核细胞表达HIF-1α、HIF-1β、MMP-2及Ⅱ型胶原.第35代髓核细胞转染p53、p21 siRNA后RT-PCR及Western blot检测示p53、p21表达明显受到抑制.第35代髓核细胞SA-β-gal染色阳性率明显高于第1代髓核细胞(P＜0.001);正常第35代髓核细胞经p53 siRNA(p53转染组)和p21 siRNA(p21转染组)转染后,SA-β-gal阳性率明显低于正常第35代髓核细胞(正常组)和加入脂质体LipofectaminTM 2000而无siRNA的第35代髓核细胞(阴性对照组),差异有统计学意义(P＜ 0.001).细胞周期分析显示,p53转染组及p21转染组G1期百分比均明显低于正常组和阴性对照组(P＜0.05),S期百分比明显高于正常组和阴性对照组(P＜0.05).MTT生长曲线显示转染p53、p21 siRNA后可促进髓核细胞增殖.结论 沉默p53、p21基因可通过调节细胞周期而抑制髓核细胞衰老退变,改善椎间盘退变过程；沉默p53、p21基因可能是潜在的治疗椎间盘退行性变的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裘秀春		62	329	9.0	15.0
2	马保安		178	969	13.0	18.0
3	张涛		108	497	11.0	14.0
4	钱济先		42	282	10.0	15.0
5	蔡承魁		10	20	3.0	3.0
6	贠喆		8	29	3.0	5.0
7	姬振伟		9	34	3.0	5.0
8	马云雷		3	5	2.0	2.0