RBP4分子RNAi载体的制备及对人肝细胞系LO2中ERK信号通路的影响

• 作者: 钱磊 陈兵 陈冠军 陈利春 陈莉 鲁云霞
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 视黄醇结合蛋白4 RNA干涉 LO2细胞 ERK1/2 葡萄糖摄取
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 883-887
• 分类号: R349.54
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2012.08.001

摘要

目的 制备人视黄醇结合蛋白4(RBP4)分子RNAi载体,检测其干涉人肝细胞系LO2中RBP4的表达后对ERK1/2表达及磷酸化和葡萄糖摄取的影响.方法 分别构建针对RBP4基因表达框5′端和3′端的干涉载体及真核表达载体,经测序和酶切鉴定后将载体转染LO2,RT-PCR和Western blot法确定其干涉RBP4表达的效率,选择干涉较高的载体用于后续实验;Western blot检测ERK1/2的表达及磷酸化水平的改变,葡萄糖氧化酶法检测上清液中葡萄糖的残留量.结果 构建的真核表达载体和干涉载体经酶切、测序鉴定结果正确,并有明显的高表达或干涉效果.Western blot结果表明ERK1/2的表达量无明显变化,RBP4高表达组其磷酸化显著下降,RBP4干涉组其磷酸化显著上升.胰岛素刺激后RBP4高表达组的葡萄糖摄取明显下降,RBP4干涉组的葡萄糖摄取明显增加.结论 成功制备RBP4基因的干涉载体并应用于LO2细胞中ERK1/2通路的研究,为后续RBP4的进一步功能研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈冠军	安徽医科大学生物化学教研室	12	36	4.0	5.0
2	陈利春	安徽医科大学妇幼保健临床学院产科	1	0	0.0	0.0
3	钱磊	安徽医科大学生物化学教研室	3	0	0.0	0.0
4	陈莉	安徽医科大学生物化学教研室	10	35	3.0	5.0
5	陈兵	安徽医科大学生物化学教研室	28	94	5.0	7.0
6	鲁云霞	安徽医科大学生物化学教研室	48	229	8.0	12.0