斜纹夜蛾铁硫亚基蛋白的表达及功能鉴定

• 作者: 刘海远 左洪亮 钟国华 陈永 高璐
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 斜纹夜蛾 铁硫亚基蛋白 原核表达 蛋白功能 SL-1细胞
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 139-146
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

铁硫亚基蛋白(rieske iron-sulfur protein,RISP)是线粒体复合物Ⅲ的关键蛋白亚基之一,在呼吸链电子传递过程中起到重要作用.本研究通过RT-PCR克隆得到斜纹夜蛾Spodoptera litura RISP基因SlitRISP的ORF,构建了pET32a-SlitRISP原核表达载体,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,SlitRISP原核表达蛋白以包涵体的形式存在于菌体沉淀中,且RISP抗体可成功用于该蛋白的免疫印迹检测.为了进一步鉴定SlitRISP在斜纹夜蛾离体细胞系SL-1中的功能,通过向细胞内转染siRNA,利用RNAi技术沉默SL-1中的SlitRISP.qRT-PCR结果表明,分别经50 nmol/L和100 nmol/L siRNA处理48 h后,SL-1中SlitRISP的表达均几乎完全被抑制；Western blot结果显示,SL-1中SlitRISP含量显著低于CK.当SL-1 SlitRISP被成功沉默后,通过检测SL-1线粒体膜电位、细胞ATP含量和细胞增殖抑制率鉴定RISP在线粒体电子传递过程中的重要作用.流式细胞仪测定结果表明,经50 nmol/L和100 nmol/L siRNA处理24h后,SL-1线粒体膜电位相对于CK分别降低23.52％和11.32％,而处理48h后,SL-1线粒体膜电位则分别升高5.58％和27.66％；siRNA处理24h和48 h后,SL-1 ATP含量相对于CK分别降低82.71％和84.50％,最终导致SL-1细胞增殖抑制率分别为53.64％和67.94％.这些结果表明SlitRISP在SL-1中参与线粒体膜电位的形成和细胞ATP的合成.介于RISP在线粒体电子传递链中的重要作用,其可能成为新型杀虫作用靶标,这可为研制新型呼吸抑制剂提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟国华	华南农业大学昆虫毒理研究室	109	1742	22.0	36.0
2	陈永	华南农业大学昆虫毒理研究室	17	129	8.0	10.0
3	刘海远	华南农业大学昆虫毒理研究室	5	15	2.0	3.0
4	左洪亮	华南农业大学昆虫毒理研究室	7	36	4.0	5.0
5	高璐	华南农业大学昆虫毒理研究室	6	29	3.0	5.0