运用双向荧光差异凝胶电泳分析VLDL致THP-1来源泡沫细胞的形成

• 作者: 宗义强 狄勇 田俊 鲁艳军
• 来源期刊: 检验医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 极低密度脂蛋白 双向荧光差异凝胶电泳 泡沫细胞 蛋白质组
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 生物化学检验论著
• 页码范围: 50-56
• 分类号: Q513
• 字数: 4323字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2012.01.014

摘要

目的 运用双向荧光差异凝胶电泳结合质谱技术寻找极低密度脂蛋白(VLDL)致诱导分化的THP-1细胞形成泡沫细胞中的关键蛋白质,以期揭示其致泡沫细胞的机制.方法 THP-1细胞经佛波醇脂(PMA)诱导分化为巨噬细胞,以磷酸盐缓冲液(PBS)孵育为空白对照组、VLDL孵育为实验组.提取细胞总蛋白后分别用荧光染料CY3和CY5标记,以所有样本等量混合作为“内标”,用CY2标记,然后将实验组、空白对照组及内标混合后进行二维电泳,扫描图像后经分析的差异蛋白做基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( MALDI-TOF-MS).采用逆转录-聚合酶链反应(RT-CPR)分析3种蛋白质(脂肪分化相关蛋白、烯醇化酶1、磷酸甘油酸变位酶1)mRNA的变化.结果 实验组与空白对照组比较,表达量上调蛋白点在1.2倍以上有34个,表达量下调1.2倍以上有48个.通过软件筛选其中14个有差异的蛋白点做MALDI-TOF-MS,其中脂肪分化相关蛋白、热休克蛋白27、人电子转移味蛋白三维结构-链A、s100钙结合蛋白、人过氧化物酶-3-异构体c、辅酶-细胞色素C还原酶核心蛋白Ⅰ、过氧化物酶烯酰辅酶A水合酶样蛋白、富马酸合酶-异构体d表达增高,烯醇化酶1、磷酸甘油酸变位酶1、环孢素A结合双肽甘氨酸-脯氨酸复合物、DMGDH蛋白、核内不均一核糖核蛋白L-异构体a、果糖胺3激酶-异构体b表达降低.脂肪分化相关蛋白mRNA表达明显上调,烯醇化酶1、磷酸甘油酸变位酶1 mRNA表达明显下调,与蛋白水平变化一致.结论 荧光差异凝胶电泳能在整体上揭示VLDL在致泡沫细胞形成过程中蛋白质水平的变化,经鉴定的蛋白质可能在VLDL致泡沫细胞的形成中发挥重要的作用,为阐明VLDL作用巨噬细胞形成泡沫细胞的机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宗义强	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	25	99	6.0	8.0
2	田俊	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	39	207	9.0	12.0
3	鲁艳军	华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科	7	52	4.0	7.0
4	狄勇	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	2	15	1.0	2.0