人白介素-4与大肠杆菌二硫键异构酶DsbC在大肠杆菌中的融合表达及羟胺切割后共复性

• 作者: 孙卫国 曹志红 李国利 李邦印 熊志红 程小星
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人白细胞介素-4 大肠杆菌二硫键异构酶 羟胺切割 包涵体 共复性
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 页码范围: 669-672
• 分类号: Q78
• 字数: 3205字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.05.010

摘要

目的:通过融合表达、羟胺切割、与二硫键异构酶共复性,获得高表达、高纯度、高生物活性的重组人白细胞介素-4(rhIL-4).方法:将5端引入了羟胺切割位点的hIL-4基因克隆到大肠杆菌二硫键异构酶DsbC的原核表达载体pET-DsbC中,IPTG诱导表达,对包涵体进行纯化,然后在变性条件下经羟胺切割,利用DsbC的分子伴侣功能与hIL-4进行共复性,最后利用阳离子交换层析纯化获得rhIL-4蛋白.结果:融合蛋白DsbC-hIL-4的表达量占细菌总蛋白的40%以上,以包涵体形式存在;纯化后得到的rhIL-4的相对分子量为15×103,与预期一致,电泳纯度达95%;细胞学实验测定其具有良好的生物学活性.结论:通过融合表达的方法可以提高hIL-4的原核表达量;利用共复性的方式极大地提高了hIL-4的复性率和生物活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李国利	解放军第309医院结核病研究所	17	126	6.0	11.0
2	李邦印	解放军第309医院结核病研究所	11	50	3.0	6.0
3	程小星	解放军第309医院结核病研究所	35	111	5.0	7.0
4	曹志红	解放军第309医院结核病研究所	9	25	3.0	4.0
5	孙卫国	解放军第309医院结核病研究所	15	23	2.0	3.0
6	熊志红	解放军第309医院结核病研究所	13	73	2.0	8.0