正交设计优化草地早熟禾SRAP-PCR反应体系及引物筛选

• 作者: 任小巍 王瑜 袁庆华
• 来源期刊: 草业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 草地早熟禾 SRAP标记 正交试验设计 引物筛选
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 植物生产层
• 页码范围: 411-416
• 页数: 6页
• 分类号: S688.4|Q945.79
• 语种: 中文

摘要

采用L9（34）正交试验设计方法,对草地早熟禾（Poa pratensis）基因组DNA SRAP-PCR反应体系中的TaqDNA聚合酶、Mg2＋、引物及dNTP四因素的用量进行优化,并比较不同模板DNA用量对扩增的影响,建立草地早熟禾SRAP-PCR最佳反应体系,同时,利用该体系对SRAP引物进行筛选。结果表明,草地早熟禾SRAP-PCR最佳反应体系为Taq DNA聚合酶1.0U、Mg2＋1.75mmol.L-1、引物0.25μmol.L-1、dNTP 220μmol.L-1、40ng模板DNA、2μL 10×PCR buffer,总体积20μL。运用该体系从100对SRAP引物中筛选出43对引物能够产生清晰稳定的扩增条带且多态性丰富。优化体系的建立及引物的筛选可为今后利用SRAP标记技术对草地早熟禾进行遗传多样性分析、图谱构建、种质资源鉴定奠定技术基础。