基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用

• 作者: 余道军 吴盛海 徐丽慧 王贤军 范大鹏 陈光
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 分枝杆菌属 多重聚合酶链反应 DNA引物
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 722-725
• 分类号: R378.91
• 字数: 3790字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.08.015

摘要

目的 利用多重荧光PCR技术,建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法.方法 以分枝杆菌16S rRNA作为检测靶基因,设计双启动寡核苷酸(DPO)引物和TaqMan探针,探针的5’端分别用FAM 、ROX、HEX和JOE进行荧光标记,3’端标记淬灭荧光.通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增,评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度.采用建立的多重荧光PCR方法,采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本,结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较.采用x2检验比较3种方法的阳性率.结果 该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌,检测灵敏度均为1 ×101 cfu/ml.对68份痰液标本进行检测,结果显示31份检测结果阳性,阳性率45.6％,明显高于涂片染色镜检(阳性率14.7％),差异具有统计学意义(x2=15.4,P ＜0.05),其中28例为结核分枝杆菌,1例为鸟分枝杆菌,2例为胞内分枝杆菌,与细菌培养鉴定方法一致.1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌.结论 本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速,能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌,可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余道军	杭州市第一人民医院检验科	47	401	12.0	18.0
2	吴盛海	杭州市第一人民医院检验科	27	150	6.0	10.0
3	徐丽慧	杭州市第一人民医院检验科	8	62	5.0	7.0
4	王贤军	杭州市第一人民医院检验科	38	263	9.0	13.0
5	陈光	浙江大学附属邵逸夫医院检验科	23	323	10.0	17.0
6	范大鹏	杭州市红十字会医院结核实验室	9	23	2.0	4.0