烟草HrBP的研究与应用

• 作者: 于丹丹 刘家驹 宋宝安 李向阳 杨松 毕亮 王贞超 胡德禹 郭勤 陈卓
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: Harpin结合蛋白 生物信息学分析 基因克隆表达 多克隆抗体制备 烟草组织差异表达
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 59-68
• 分类号: S961.6
• 字数: 8406字
• 语种: 中文

摘要

旨在进一步发掘HrBP在新农药创制和抗病品种选育等方面的价值,采用BLAST和Clustal X2软件对HrBP进行序列同源性分析,发现其序列较保守;采用PSIPRED Protein Structure Prediction在线服务器进行烟草HrBP二级结构预测,采用UCLDepartment of Computer Science进行HrBP跨膜结构预测,发现两种可能存在的跨膜方式;采用SWISS-MODEL、Phyre和CPH进行HrBP空间结构预测,发现以膜蛋白为模板进行模建的蛋白具有相似的空间结构;建立基于Real-time PCR的HrBP mRNA定量分析方法,其相关系数为0.999 6;通过ProtScale方法分析HrBP抗原指数,并获得序列特异性较高的多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法制备多肽,并由此制备多克隆抗体,采用Indirect-ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,表明多克隆抗体可特异识别烟草HrBP.采用DIBA和Western blotting试验研究多克隆抗体对常见植物的抗原识别特性,发现多克隆抗体对这些植物的HrBP均有一定识别能力.此外,采用Real-time PCR和Indirect-ELISA等方法进行烟草各组织部位HrBP的表达量的研究,发现HrBP在各组织部位存在差异表达.