p100蛋白慢病毒干扰载体及p100沉默的HepG2稳定细胞系的构建

• 作者: 丁建民 宋娟 尹洁 杨洁 经翔 高星杰 黄丽
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: RNA干扰 细胞系,肿瘤 质粒 慢病毒载体 p100蛋白 HepG2细胞系
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 529-532,后插1
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2012.06.001

摘要

目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的HepG2人肝癌细胞系.方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的Oligo DNA并构建p LKO.3G-p1001慢病毒载体,用双酶切及测序进行鉴定.将构建好的p100 shRNA表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒.运用病毒颗粒感染HepG2细胞,获得p100稳定沉默的细胞系.荧光显微镜下观察感染效率,利用Western blot方法检测稳定细胞株中p100的沉默效果.结果:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默p100及对照的HepG2细胞株.慢病毒感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到90％以上细胞发出绿色荧光,Western blot证实干扰p100后,HepG2细胞株中p100蛋白表达水平明显降低.结论:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒干扰载体及p100稳定沉默的HepG2细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨洁	天津医科大学免疫教研室	56	151	7.0	10.0
5	经翔		51	344	12.0	15.0
6	高星杰	天津医科大学基础医学研究中心	18	24	3.0	3.0
7	宋娟	天津医科大学免疫教研室	6	15	2.0	3.0
8	尹洁	天津医科大学基础医学研究中心	6	9	2.0	2.0
9	丁建民		27	214	10.0	13.0
10	黄丽	天津医科大学免疫教研室	2	1	1.0	1.0