肾癌ACHN细胞HIF-1α基因siRNA真核表达质粒的构建与筛选

• 作者: 王子明 种铁 马亚东
• 来源期刊: 现代泌尿外科杂志
• 关键词: 肾透明细胞癌 ACHN细胞 缺氧诱导因子-1α 质粒 小干扰RNA
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 337-341
• 分类号: R737
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-8291.2012.04.006

摘要

目的 采用RNA干扰方法,构建及筛选对肾透明细胞癌ACHN细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因有干扰沉默作用的真核表达质粒.方法 CoCl2缺氧诱导培养ACHN细胞高表达HIF-1α,设计并化学合成4条针对HIF-1α基因的小干扰RNA(siRNA)序列,构建相应真核表达质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2/3/4,经测序分析,质粒构建成功后,分别转染ACHN细胞后培养24 h,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计算转染效率,采用荧光实时定量PCR(real time-PCR)和免疫印记杂交法(Western blot)分别检测HIF-1α的 mRNA与蛋白表达水平.结果 质粒构建后经测序显示与设计完全一致;荧光显微镜下观察到ACHN细胞表达绿色荧光蛋白,证实重组质粒已转入细胞,转染效率约为78%;实时定量PCR与Western blot结果显示,siRNA-1/2组HIF-1α的mRNA与蛋白表达较对照组均明显下降(P<0.05),质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2明显干扰抑制ACHN细胞HIF-1α基因表达,其中以质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1效果最佳.结论 本实验成功构建靶向HIF-1α基因的真核表达质粒,并筛选出能有效抑制ACHN细胞HIF-1α基因表达的质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2,这为肾癌的基因治疗提供了新的方法和手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	种铁	西安交通大学医学院第二附属医院泌尿外科	88	354	11.0	15.0
2	王子明	西安交通大学医学院第二附属医院泌尿外科	82	342	9.0	15.0
3	马亚东	延安大学附属医院泌尿外科	13	44	4.0	6.0