hTPO膜外区基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

• 作者: 刘金泉 方佩华 李宁 李进 肖茜 韩梅
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 碘化物过氧化物酶 甲状腺 遗传载体 聚合酶链反应 大肠杆菌 基因克隆
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 543-546
• 分类号: R581
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2012.06.005

摘要

目的:探索克隆人甲状腺过氧化物酶(hTPO)膜外区基因并构建其杆状病毒表达载体.方法:PCR扩增hT-PO膜外区基因,并将其先后重组入pGEM3zf(+)质粒和pFastBacl质粒,以hTPO-pFastBAC1质粒转染E.coli DH 10Bac大肠杆菌,获得重组hTPO杆状病毒表达载体(hTPO-Bacmid),每一步均以PCR及酶切、基因测序等方法鉴定其正确性.结果:与预期一致,PCR扩增hTPO膜外区基因的产物为一约2.5 kb的条带；hTPO-pGEM3zf(+)经EcoR Ⅰ+HindⅢ、EcoR Ⅰ+SalⅠ双酶切后均获得2.5和3.2 kb条带；hTPO-pFastBAC1以EcoR Ⅰ+HindⅢ双酶切得到2.5和4.8 kb的带,均符合预期.分别以重组hTPO-pGEM3zf(+)质粒、hTPO-pFastBAC1质粒为模板进行PCR扩增鉴定,均得到约2.5 kb的目的条带；对hTPO-Bacmid进行PCR鉴定,得到约4.8 kb的片段.对hTPO-pFastBAC1上下游接口测序正确无误.结论:本研究成功克隆了hTPO膜外区基因,并完成了其杆状病毒表达载体hTPO-Bacmid的构建.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩梅	天津医科大学总医院核医学科	14	51	4.0	6.0
2	李宁	天津医科大学总医院核医学科	60	243	8.0	12.0
3	方佩华	天津医科大学总医院核医学科	94	705	14.0	22.0
4	刘金泉	天津医科大学总医院代谢病科	10	41	5.0	6.0
5	李进	天津医科大学总医院核医学科	2	3	1.0	1.0
6	肖茜	天津医科大学总医院核医学科	20	90	7.0	9.0