非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞中的作用

• 作者: 刘宁宁 吕军华 吴海珍 周恩民 张冲 王向鹏 肖一红 胡守彬 赵菲菲 赵钦 马玉萍
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A 杆状病毒 抑制作用
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 1455-1462
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 5321字
• 语种: 中文

摘要

前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5蛋白的抗独特型抗体特异性结合Marc-145细胞上的非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(Nonmuscle myosin heavy chainⅡ-A,NMHCⅡ-A)蛋白,其结合位点位于NMHCⅡ-A的羧基端.本研究通过真核表达NMHCⅡ-A的羧基端(PRA)蛋白,验证其对PRRSV感染Marc-145细胞的作用.通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达PRA蛋白.Western blot和间接免疫荧光鉴定PRA蛋白的表达及其与Marc-145细胞的结合.通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量PCR检测PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的作用.Western blot和间接免疫荧光结果表明,PRA蛋白在真核细胞中得到成功表达,其最高表达量为接种1个MOI杆状病毒后96 h时.PRA蛋白特异性结合Marc-145细胞,使PRRSV感染Marc-145细胞延迟24 h并且感染效率降低60％.真核表达的NMHCⅡ-A羧基端蛋白能特异性结合Marc-145细胞并有效降低PRRSV的感染.这些结果为进一步阐明NMHCⅡ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用提供了新的依据.