香蕉束顶病毒Haikou 2分离物DNA2编码框原核表达及抗血清制备

• 作者: 余乃通 刘志昕 周朋 张雨良 王健华 王洪星 章绍延 谭老喜
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 香蕉束顶病毒Haikou2分离物 BBTVDNA2 原核表达 抗血清制备
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 作物病虫害及防治、环境保护
• 页码范围: 2246-2251
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|S432.41
• 字数: 4723字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2012.12.024

摘要

香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产.BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究.本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2ORF,将其构建到pET32a载体中,进行原核表达和抗血清制备.结果表明重组表达载体pET32a-DNA2ORF在表达菌Transetta(DE3)中表达一个约21 ku的特异融合蛋白,通过超声波破碎仪破碎细胞和诱导条件优化,分析表明,该蛋白主要以可溶形式存在,最佳表达条件为30℃、1.0 mmol/L IPTG诱导3h.融合蛋白经过Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化,免疫家兔制备出抗血清.Western blot实验表明抗血清具有特异性; 酶联法(ID-ELISA)测定表明,抗血清效价达到25 000,能够检测出香蕉汁液中加入的0.954 μg/mL浓度的表达纯化蛋白.