抗猪流感噬菌体单链抗体库的构建与筛选

• 作者: 刘迎春 孙卫东 宋宁宁 杨康 王权 蒋蔚 陈永军
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 噬菌体展示技术 单链抗体
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 21-25
• 分类号: S852.65
• 字数: 4332字
• 语种: 中文

摘要

利用噬菌体展示技术构建猪流感病毒噬菌体抗体库,并筛选出猪流感高特异性、高亲和力的单链抗体(scFv).以猪流感病毒免疫BALB/c小鼠,提取脾细胞总RNA,反转录后以cDNA为模板扩增获得VH基因和VL基因,并采用重叠延伸PCR(SOE-PCR),用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)按VH-Linker-VL方式将VH基因和VL基因拼接成SCFv基因片段.将scFv基因和pCANTAB5E载体分别双酶切(Sfi I/Not1)后连接,转化宿主菌TG1,经过辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体单链抗体库.以猪流感病毒为抗原包被96孔酶标板,经过3轮的亲和富集筛选,用Phage-ELISA鉴定阳性重组抗体.本研究成功构建出库容约为4×106 cfu/mL抗猪流感病毒的单链抗体库,并筛选出4株特异性抗猪流感病毒的scFv抗体,能够与鼠源阳性多抗进行竞争结合猪流感病毒,为抗猪流感病毒转基因猪的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王权	中国农业科学院上海兽医研究所	65	346	11.0	15.0
2	孙卫东	南京农业大学动物医学院	79	493	12.0	17.0
3	蒋蔚	中国农业科学院上海兽医研究所	25	104	6.0	9.0
4	刘迎春	中国农业科学院上海兽医研究所	13	74	5.0	8.0
5	陈永军	中国农业科学院上海兽医研究所	27	211	10.0	14.0
6	杨康	中国农业科学院上海兽医研究所	5	19	3.0	4.0
8	宋宁宁	中国农业科学院上海兽医研究所	5	27	3.0	5.0