RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系的构建

• 作者: 周家砚 应逸 张玉平 王春丽 王顺清 许艳丽 邓晖
• 来源期刊: 白血病·淋巴瘤
• 学科: 医学
• 关键词: RYBP基因 短发夹状RNA HL-60细胞 慢病毒属 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 577-580
• 分类号: R733.7
• 字数: 2853字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9921.2012.10.001

摘要

目的 利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,建立RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系.方法 设计针对RYBP基因的5条短发夹状RNA( shRNA)序列,构建RYBPshRNA慢病毒重组载体,分别包装成慢病毒颗粒,直接感染HL-60细胞,同时设空载体和阴性对照shRNA慢病毒对照组.通过观察绿色荧光蛋白表达以监测感染效率,经嘌呤霉素(终质量浓度8 μg/ml)筛选出稳定感染细胞.Western blot实验初步鉴定出蛋白水平最低的RYBPshRNA组,用实时定量聚合酶链反应(PCR)进一步检测该组细胞mRNA表达水平.结果 慢病毒感染的HL-60细胞经嘌呤霉素筛选成功,与对照组比较,5条RYBP shRNA组细胞RYBP表达均有不同程度减低(P＜0.01),其中以shRNA2沉默效果最佳,且shRNA2组的RYBP基因mRNA水平降低了95％以上(P＜0.05).结论 慢病毒介导的shRNA2能高效、稳定地沉默RYBP基因的表达,成功构建了RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	应逸	广州医学院附属广州市第一人民医院血液科	18	88	5.0	9.0
2	许艳丽	广州医学院附属广州市第一人民医院血液科	27	93	5.0	8.0
3	王春丽	广州医学院附属广州市第一人民医院血液科	3	12	3.0	3.0
4	王顺清	广州医学院附属广州市第一人民医院血液科	19	49	4.0	6.0
5	张玉平	广州医学院附属广州市第一人民医院血液科	13	42	3.0	5.0
6	邓晖	广州医学院附属广州市第一人民医院血液科	5	22	4.0	4.0
7	周家砚	广州医学院附属广州市第一人民医院血液科	1	3	1.0	1.0