反转录病毒载体介导Indian hedgehog信号蛋白在C3H10T1/2细胞中的表达及成骨诱导潜能

• 作者: 张玲玲 李铮 杨施 田汝辉 胡洪亮 邹沙沙 陈婷婷
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 骨发育 Ihh 反转录病毒 C3H10T1/2 成骨
• 年，卷（期）: 2012,（24）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 4381-4386
• 分类号: R318
• 字数: 4293字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.24.003

摘要

背景:目前大量研究证实Indian hedgehog(Ihh)信号通路在骨发育中发挥着重要的调控作用.目的:克隆Ihh重组反转录病毒载体,观察Ihh在C3H10T1/2细胞中的表达及其成骨诱导效果.方法:采用分子克隆技术将Ihh基因与增强型绿色荧光蛋白基因克隆到反转录病毒载体pSFG上,包装出假病毒转染C3H10T1/2细胞,在共聚焦显微镜下观察其绿色荧光蛋白强度及转染效率.运用Western blot方法检测Ihh蛋白的表达,观察C3H10T1/2细胞形态学变化,碱性磷酸酶染色检测成骨活性.结果与结论:共聚焦显微镜下观察到大量的绿色荧光表达,Western blot检测结果显示Ihh基因及增强型绿色荧光蛋白基因在C3H10T1/2中呈显著共表达.在体外培养过程中,Ihh能诱导C3H10T1/2细胞形态学发生改变,增加碱性磷酸酶活性,提示Ihh具有诱导C3H10T1/2细胞向骨细胞分化的潜能.