YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及机制初探

• 作者: 修冰 张文君 梁伟 梁爱斌 秦伟 陆惠娜 高青梅 黄滨滨
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 淋巴瘤 细胞凋亡 YM155
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 700-704
• 分类号: R557.4
• 字数: 3736字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2012.10.017

摘要

目的 研究生存素(survivin)抑制剂YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及作用机制,为应用YM155治疗淋巴瘤提供实验依据.方法 培养滤泡淋巴瘤细胞株SUDHL-4至对数生长期,加入YM155形成一系列浓度梯度:100、10、1、0.1、0 ng/ml,培养24、48、72 h后进行活细胞计数试剂盒(CCK)8实验,观察YM155对其生长抑制效应,计算其细胞半数抑制药物浓度(IC50).加入YM155至培养瓶中使其药物浓度为1 ng/ml,培养24、48、72 h进行流式细胞术检测,膜联蛋白(Annexin)V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法观察细胞凋亡情况.选取不加药的对照组和加YM155后24、48 h的实验组细胞抽提总RNA,然后进行反转录PCR(RT-PCR)检测48 h时抗凋亡基因bcl-2、bcl-xl、survivin和促凋亡基因bid、bax的mRNA的相对表达量,检测24h时survivin mRNA的相对表达量.同时抽提各个时间点的总蛋白用Western印迹技术检测survivin、半胱氨酸蛋白酶(caspase)9、活化的caspase-9、caspase-3和活化的caspase-3蛋白的表达量.结果 YM155对SUDHL-4具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性,24、48、72 h的IC50分别为6.1、2.7、1.2ng/ml.用流式细胞仪分析发现细胞凋亡比例随时间的推移逐步增加(17.3％±2.1％、35.7％±3.3％、54.6％±4.3％比2.1％±0.3％,均P＜0.05)；PCR结果显示YM155作用后24和48 h下调survivin基因mRNA的表达(0.72±0.02、0.56±0.01比1.00,均P＜0.05),但bcl-2家族基因表达变化不显著(P＞0.05).Western印迹检测发现随着时间的推移,survivin、caspase-3蛋白的表达逐渐减低,caspase-9和活化的caspase-9蛋白表达没有明显变化,而活化的caspase-3表达逐渐增加.结论 YM155能够有效促进淋巴瘤SUDHL-4细胞株凋亡,其机制可能是由于survivin蛋白下调绕过caspase-9直接激活下游caspase-3,从而切割DNA引发凋亡；bcl-2家族基因可能并未参与此过程.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦伟	同济大学附属同济医院血液科	19	97	5.0	9.0
2	梁爱斌	同济大学附属同济医院血液科	68	223	7.0	10.0
3	梁伟	浙江省宁波市第一医院检验科	11	47	4.0	6.0
4	张文君	同济大学附属同济医院血液科	17	90	5.0	9.0
5	高青梅	同济大学附属同济医院血液科	6	32	4.0	5.0
6	陆惠娜	同济大学附属同济医院血液科	15	66	5.0	7.0
7	黄滨滨	同济大学附属同济医院血液科	13	45	4.0	6.0
8	修冰	同济大学附属同济医院血液科	21	62	5.0	7.0