草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立

• 作者: 丁正峰 唐建清 夏爱军 熊怀生 王晓丰 薛晖
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼出血病 呼肠孤病毒 逆转录环介导等温扩增 检测方法
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 465-469
• 分类号: S917
• 字数: 3561字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0384.2012.05.003

摘要

为更加快速、灵敏地检测草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV),建立环介导等温扩增(RTLAMP)检测方法.根据GenBank中GCRV HZ08等毒株VP6蛋白基因序列设计引物,以GCRV弱毒疫苗株( GCHV-892)总RNA为模板建立RT-LAMP反应,对扩增产物用限制性内切酶PvuⅡ进行酶切鉴定,所得酶切产物大小符合预期值.随后对LAMP反应体系包括Mg2+、dNTPs、甜菜碱(betaine)和内外引物浓度比进行了优化,并以含VP6蛋白基因的重组质粒(pEASY-VP6)为模板考量了该方法的敏感性,结果显示最低检测限为10 copies·μL-1,比RT-PCR检测方法敏感10倍.特异性试验表明与白斑综合征病毒(WSSV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、病毒性神经坏死病毒(VNNV)无交叉反应.应用RT-LAMP方法检测16份疑似出血病草鱼,6份病料获得了阳性扩增,与RT-PCR检测结果一致.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王晓丰		10	92	6.0	9.0
2	丁正峰		17	189	9.0	13.0