大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子真核表达载体的构建及其体外表达的鉴定

• 作者: 何健 尹宗生 张胜权 罗庆礼 高维陆
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 表皮生长因子 睫状神经营养因子 真核表达载体 转染 大鼠 干细胞
• 年，卷（期）: 2012,（23）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4284-4289
• 分类号: R394.2
• 字数: 5865字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.23.021

摘要

背景:星形胶质细胞被激活后表现出神经干细胞的特性,细胞表面的神经营养因子(表皮生长因子、睫状神经营养因子)受体超表达,通过改善复杂的内环境,有利于定向诱导神经干细胞向神经元的分化.目的:构建大鼠pSecTag2/Hygro B-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF真核表达质粒,检测其在cos-7细胞中的共表达.方法:采用反转录-聚合酶链反应技术从大鼠颌下腺、坐骨神经组织总RNA中扩增出表皮生长因子、睫状神经营养因子基因功能区,将上述基因片段分别连接到真核表达载体pSecTag2/Hygro B,聚合酶链反应初步筛选、双酶切鉴定后送测序.将构建成功的两种重组载体单独及共转染cos-7细胞,Western blot法鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白的瞬时表达.结果与结论:反转录-聚合酶链反应结果证实成功获得大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子cDNA.DNA序列分析证实2种真核表达载体中的表皮生长因子、睫状神经营养因子序列与GenBank中目的序列一致.脂质体介导转染cos-7细胞48 h后,Western blot鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白在cos-7细胞中的表达,分别在Mr6 000,22 000处出现阳性条带.提示大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子基因的真核表达载体pSecTag2/Hygro B-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF构建成功,共转染cos-7细胞后能够共表达重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹宗生	安徽医科大学第一附属医院骨科	142	863	16.0	21.0
2	张胜权	安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室	64	295	8.0	14.0
3	罗庆礼	安徽医科大学安徽省部共建重要遗传病基因资源利用重点实验室	25	87	6.0	7.0
4	何健	安徽医科大学第一附属医院骨科	4	9	2.0	3.0
5	高维陆	安徽医科大学第一附属医院骨科	19	97	5.0	9.0