大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

• 作者: 徐铁军 曲德伟 欧阳长杰 滕大才 王德广
• 来源期刊: 解剖学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 脑源性神经营养因子基因 重组质粒 基因表达 COS-7细胞
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 82-85,108
• 分类号: Q344.13
• 字数: 3570字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1633.2012.01.028

摘要

目的:构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因真核表达载体,检测其转染COS-7细胞后的表达.方法:从大鼠海马组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因片段,克隆至pGEM-T载体中.经测序确证后将BDNFcDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接.将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-BDNF以脂质体法转染至COS-7细胞中,用RT-PCR鉴定BDNF mRNA的表达,免疫印迹法检测BDNF蛋白质表达水平.结果:克隆了BDNF的cDNA,并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-BDNF,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性；免疫印迹法分析显示,转染48 h时,COS-7细胞以分泌proBDNF-GFP融合蛋白为主,在96 h以分泌成熟BDNF-GFP融合蛋白为主.结论:成功构建pEGFP-N1-BDNF真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到高效表达,BDNF前体及成熟体同时分泌到胞外,在不同时间点分泌组合不同.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲德伟	徐州医学院人体解剖学教研室	15	30	3.0	4.0
2	徐铁军	徐州医学院人体解剖学教研室	61	333	10.0	16.0
3	滕大才	徐州医学院人体解剖学教研室	20	25	2.0	4.0
4	王德广	徐州医学院人体解剖学教研室	52	214	8.0	13.0
5	欧阳长杰	徐州医学院人体解剖学教研室	9	15	2.0	3.0