鲤肠道sglt1基因的表达与抗体制备

• 作者: 侯彩霞 张建新 张新胜 王俊丽 王贝 聂国兴 郑俊林 闫潇
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鲤 钠/葡萄糖共转运载体1 原核表达 ELISA 抗体效价
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 页码范围: 329-335
• 分类号: S917|Q789
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2012.27810

摘要

钠/葡萄糖共转运载体1( sodium/glucose cotransporter 1,Sglt1)是协助葡萄糖吸收的主要蛋白.实验首先采用RT-PCR获取sglt1基因全长,克隆至PGME-T载体进行序列及免疫原性分析,选择长度为92个氨基酸(544 ～637)的多肽作为目的片段(sglt1-P)),扩增sglt1-P,引入双酶切位点EcoR I和HindⅢ后,连接至pET-32a(+)上,构建表达载体pET-32a(+)-sglt1-P,转化至E.coli Rosetta中,获得重组基因工程菌,通过IPTG诱导表达,获得目标多肽,并以此为抗原制备Sglt1特异性抗体.SDS-PAGE电泳分析表明,目标多肽分子量约为30 ku.采用耳缘静脉结合皮下注射,免疫新西兰长耳兔,免疫总时长为38 d.制备了鲤Sglt1抗体,ELISA测得效价为1∶105;免疫组化结果表明,抗体具有较高亲和力和特异性,可以应用于鲤Sglt1的表达定位研究.该抗体的获得为鲤肠道Sglt1表达及转运活性的系统研究奠定了基础,同时,获取的Sglt1抗体亦可用于其它鱼类Sglt1转运蛋白表达定位和定量研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	聂国兴	河南师范大学生命科学学院	165	1275	18.0	30.0
2	张新胜	河南师范大学生命科学学院	33	177	8.0	11.0
3	王俊丽	河南师范大学生命科学学院	44	518	12.0	21.0
4	张建新	河南师范大学生命科学学院	69	414	14.0	18.0
5	闫潇	河南师范大学生命科学学院	14	23	3.0	4.0
6	王贝	河南师范大学生命科学学院	2	9	2.0	2.0
7	侯彩霞	河南师范大学生命科学学院	3	12	3.0	3.0
8	郑俊林	河南师范大学生命科学学院	3	49	2.0	3.0