利用根癌农杆菌T-DNA插入突变寻找参与漆酶葡萄糖阻遏的关键基因

• 作者: 朱旭东 李中明 潘皎
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 新型隐球酵母 根癌农杆菌介导的转化 漆酶
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传的分子生物学
• 页码范围: 44-51
• 分类号: Q814
• 语种: 中文

摘要

[目的]新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)是人类重要致病真菌,主要毒性因子之一漆酶的表达受葡糖糖阻遏,机制未知.本文拟寻找参与葡萄糖阻遏的关键基因.[方法]建立根癌农杆菌介导的转化方法(Agrobacterium tumefanciens-mediated transformation,ATMT)建立一个容量约200000的随即插入突变文库,在高浓度葡萄糖条件下从中筛选葡萄糖去阻遏的突变株.通过Southern确定突变株中T-DNA的拷贝数,利用反向PCR获得依赖葡萄糖的漆酶阻遏基因序列.[结果]筛选到了30株葡萄糖去阻遏突变株,Southern blot发现83％的葡萄糖去抑制突变株含有单个T-DNA拷贝.初步鉴定了可能参与漆酶阻遏的10个不同生物学功能基因,如参与碳水化合物的代谢,固醇的合成,几丁质的合成,GPI脂锚钩的合成等等.[结论]ATMT突变策略可以找到一些参与漆酶葡萄糖阻遏的关键基因,为理解漆酶在致病过程中的作用机制和工业改进漆酶活性提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱旭东	南开大学生命科学学院微生物系	30	104	6.0	8.0
2	潘皎	南开大学生命科学学院微生物系	28	143	6.0	11.0
3	李中明	南开大学生命科学学院微生物系	1	5	1.0	1.0