利用RNAi技术稳定抑制ERβ表达的人成骨细胞株hFOB 1.19细胞模型的建立

• 作者: 刘少华 唐明星 张宏其 王昱翔 邓盎 郭超峰 高琪乐
• 来源期刊: 中国脊柱脊髓杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 雌激素受体β 人成骨细胞
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 722-728
• 页数: 7页
• 分类号: Q813.1
• 字数: 5036字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-406X.2012.08.12

摘要

目的:探讨利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术稳定抑制雌激素受体β(Estrogen receptor β,ERβ)表达建立人成骨细胞株hFOB 1.19细胞模型的可行性.方法:设计3种特异性ERβ-shRNA,体外合成后将其克隆人pRNAT-H 1.4/Retro逆转录病毒质粒中,并包装成逆转录病毒;ERβ-shRNA逆转录病毒瞬时感染hFOB 1.19细胞后,通过流式细胞仪检测感染效率,并使用半定量RT-PCR和Western blot检测对ERβ mRNA和蛋白表达的抑制效率;然后取ERβ抑制效率最高的hFOB l.19细胞,通过抗性筛选,将得到稳定感染的细胞扩大培养,再通过半定量RT-PCR和Western blot检测ERβ稳定抑制的效率;并应用MTT法检测ERβ稳定抑制后对细胞增殖的影响.结果:成功构建了3种ERβ-shRNA逆转录病毒载体;流式细胞仪检测结果显示,瞬时感染效率均高达70％以上;ERβ-shRNA-1、ERβ-shRNA-2、ERβ-shRNA-3逆转录病毒载体对hFOB 1.19细胞中ERβ mRNA的抑制率分别为(54.56±0.95)％、(69.60±1.12)％、(76.491.15)％,蛋白的抑制率分别为(59.21±4.44)％、(78.35±2.00)％、(85.60±2.66)％(均P＜0.05);成功筛选出稳定感染ERβ-shRNA-3逆转录病毒载体的hFOB 1.19细胞,ERβ mRNA和蛋白的抑制率分别为(83.23±2.45)％和(93.11±0.57)％(均P＜0.05),MTT法检测显示ERβ稳定抑制后对细胞的增殖没有明显影响(P＞0.05).结论:利用RNAi技术可成功建立ERβ稳定抑制的hFOB 1.19细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张宏其	中南大学湘雅医院脊柱外科湘雅脊柱外科中心	93	659	14.0	19.0
2	唐明星	中南大学湘雅医院脊柱外科湘雅脊柱外科中心	23	171	7.0	12.0
3	郭超峰	中南大学湘雅医院脊柱外科湘雅脊柱外科中心	27	198	8.0	13.0
4	刘少华	中南大学湘雅医院脊柱外科湘雅脊柱外科中心	32	265	11.0	14.0
5	高琪乐	中南大学湘雅医院脊柱外科	16	128	7.0	11.0
6	王昱翔	中南大学湘雅医院脊柱外科湘雅脊柱外科中心	8	25	3.0	4.0
7	邓盎	中南大学湘雅医院脊柱外科湘雅脊柱外科中心	7	58	3.0	7.0