NPR1多肽抗体的制备和应用

• 作者: 于丹丹 刘家驹 宋宝安 李向阳 杨松 毕亮 王贞超 胡德禹 陈卓
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 非表达型病程相关蛋白 序列分析 多肽 合成 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 145-150
• 分类号: R392
• 字数: 3869字
• 语种: 中文

摘要

根据NCBI GenBank中报道的NPR1一级结构信息,采用Blastn、Blastx、ExPASy和Protean等软件进行序列同源性和抗原性指数分析,获得三段序列特异性较高的多肤,并从中优选一段序列特异性多肤,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得序列特异性最好的多肽,采用HPLC和LC-MS测定合成多肤的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达88％、目的多肽分子量为1.92234 kD.采用碳化二亚胺法将多肽与KLH进行偶联获得免疫原Pep-KLH,并将其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体,采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清和多克隆抗体可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别烟草叶片特异性条带,其相对分子量为65 kD,与预测分子量相符,表明利用该方法制备的NPR1多肽抗体具有较高特异性和灵敏度.