草鱼出血病病毒VP6蛋白的原核表达、纯化及免疫效果

• 作者: 倪金俤 刘林 徐诗英 曹广力 李婧慧 杨鸢劼 薛仁宇 贡成良 邹勇 陈辉
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼出血病病毒 原核表达 纯化 免疫
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 页码范围: 429-435
• 分类号: S941|Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2012.27803

摘要

为了探讨草鱼出血病病毒(GCRV) VP6亚单位疫苗对草鱼出血病的免疫保护作用,将vp6基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),构建了重组质粒pET28a(+)-VP6.SDS-PAGE和Western-blotting显示,重组VP6蛋白的分子量约为43 ku,主要以包涵体形式存在,重组蛋白占菌体总蛋白的20％左右；Ni2+柱纯化后的重组蛋白,以每尾500 μg肌肉注射免疫草鱼(14～20 cm,60 ～120 g),并在第14、21、28、49、70天通过间接凝集反应检测抗体水平,结果显示,免疫注射后第14天可检测到鱼体产生的特异性抗体,第21天达到最高峰,第70天仍可检测到抗体的存在；免疫注射第21天人工接种GCRV,免疫后的草鱼对出血病的保护力达100％.