miR-23a-27a表达载体构建及功能初探

• 作者: 于双妮 卢朝辉 陈杰 马怡晖
• 来源期刊: 中华病理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微RNAs 靶基因修复 遗传载体 细胞系,肿瘤
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 实验病理学
• 页码范围: 470-474
• 分类号: R36
• 字数: 4608字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2012.07.009

摘要

目的 构建miR-23a-27a簇真核表达载体并初步探讨该簇的靶基因及其功能.方法 应用分子克隆的方法构建联合表达pre-miR-23 a-27a簇及单独表达pre-miR-23a、pre-miR-27a的真核载体,应用双荧光素酶报告基因试验和real-time PCR验证该载体表达的有效性,应用microRNA靶基因预测软件和双荧光素酶报告基因试验寻找及鉴定pre-miR-23a-27a的靶基因,应用Western blot和real-time PCR的方法在乳腺癌细胞MCF-7中初步探讨miR-27a的功能.结果 (1)pre-miR-23a-27a-pcDNA3.1、pre-miR-23a-pcDNA3.1、pre-miR-27a-pcDNA3.1重组质粒能够在真核细胞HEK293T中有效转录加工出相应的miR-23a和miR-27a;(2)miR-23a和miR-27a能够同连有Sprouty2基因MRE序列的pRL-TK重组质粒作用,但是只有miR-27a能够同连有Sprouty2基因3'-非翻译区(UTR)全长序列的pRL-TK重组质粒作用,而将Sprouty2基因3'-UTR中同miR-27a结合位点定点突变后,miR-27a无法同其作用;(3)在人乳腺癌细胞MCF-7中转染pre-miR-27a-pcDNA3.1真核表达载体,能够在蛋白水平显著影响Sprouty2基因的表达,但是对其RNA水平没有显著影响.结论 Sprouty2可能是miR-27a的功能靶基因,pre-miR-23a-27a-pcDNA3.1、pre-miR-23a-pcDNA3.1、pre-miR-27a-pcDNA3.1载体的构建为下一步深入研究miR-23a和miR-27a的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马怡晖	河南郑州大学第一附属医院病理科	1	0	0.0	0.0