肝纤维化相关细胞因子双重RNA干扰质粒的构建及转染肝星状细胞研究

• 作者: 史小玲 周德江 张建军 蒋玉凤 黄飞
• 来源期刊: 实用肝脏病杂志
• 关键词: 肝纤维化 RNA干扰 质粒载体 结缔组织生长因子 金属蛋白酶组织抑制因子-1 肝星状细胞
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 页码范围: 516-519
• 字数: 2912字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5069.2012.06.013

摘要

目的构建以大鼠CTGF和TIMP-1基因为靶点的双重RNA干扰表达载体质粒,以检测其转染肝星状细胞的效率.方法筛选出对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计1对含有短发夹结构的RNA 干扰靶点序列,分别克隆到质粒载体psiRNA-DUO-GFPzeo,构建含目的靶基因片段的重组质粒载体psiRNA-GFP-CT-GF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com(含有CTGF和TIMP-1),进行酶切和测序鉴定.将构建成功的重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染大鼠肝星状细胞,在荧光显微镜下观察质粒转染情况,用流式细胞仪检测转染效率.结果酶切与测序结果提示重组质粒 psiRNA-GFP-CTGF、psiR-NA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com成功构建;成功将重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染肝星状细胞,在24小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF +TIMP-1组转染效率分别为15±2%、13±1%、15±1%和14±2%,均低于质粒psiRNA-GFP-Com转染组(Com组,20±2%,P<0.05);在48小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF+TIMP-1组转染效率分别为10±2%、9±1%、8±2%和10±1%,均低于Com组的15±2%(P<0.05).结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位的双重RNA干扰表达质粒,能转染至肝星状细胞,并且psiRNA-GFP-Com转染效率最高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史小玲	泸州医学院附属医院中心实验室	47	121	6.0	7.0
2	黄飞	湖北省荆州市中心医院感染病科	10	13	2.0	2.0
3	张建军		7	21	2.0	4.0
4	蒋玉凤	646000 四川省泸州市 泸州医学院附属医院感染病科	1	1	1.0	1.0
5	周德江	四川省成都军区总医院消化内科	1	1	1.0	1.0