2,4-二硝基苯肼柱前衍生高效液相色谱法测定1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数

• 作者: 李恒 王雪娇 胡玥 高文运
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 非甲羟戊酸途径 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶 动力学参数 2,4-二硝基苯肼 高效液相色谱法
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1859-1864
• 页数: 6页
• 字数: 3684字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1096.2012.20447

摘要

利用含羰基化合物与2,4-二硝基苯肼在酸性条件下反应得到的产物腙对紫外-可见光有吸收的特性,采用柱前衍生高效液相色谱法测定了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数.酶反应产物1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸在碱性磷酸酶的作用下生成去磷酸化产物1-脱氧-D-木酮糖,然后与2,4-二硝基苯肼衍生成腙.衍生化反应的适宜条件为:HClO4浓度为1.5％,反应温度37℃,反应时间60 min,2,4-二硝基苯肼与1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的摩尔比为6∶1.色谱条件:0～17 min,40％～80％甲醇；18～20 min,40％甲醇.结果表明,本方法具有较高的灵敏度和良好的线性关系,1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的检出限为1.0 mg/L,在0.005～1.0 g/L范围内线性相关系数为0.999,相对标准偏差小于5.0％(n=3),标准回收率为102.22％.用本方法测得的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数Km、Vmax和Kcat与文献报道一致.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高文运	西北大学生命科学学院	12	15	3.0	3.0
2	李恒	西北大学生命科学学院	3	4	1.0	2.0
3	胡玥	西北大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0
4	王雪娇	西北大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0