牛α-IFN及FMDV P12A3C双表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达

• 作者: 兰喜 李学瑞 李宝玉 杨彬 柳纪省 殷相平
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 P12A基因 3C基因 α-干扰素 pBudCE4.1载体
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 80-84
• 分类号: S855.3
• 字数: 4030字
• 语种: 中文

摘要

从口蹄疫病毒Asia I/Jiangsu毒株的细胞毒中提取总RNA,通过RT-PCR方法分别获得FMDV的P12A及3C基因;同时以pMD18-T-α-IFN质粒为模板,PCR扩增得到α-IFN基因.将α-IFN基因及FMDV P12A及3C基因连接至双启动子表达载体pBudCE4.1上,构建成双效表达质粒pBudCE4.1-α-IFN-P12A3C,经电泳、PCR、双酶切和DNA测序鉴定表明双效质粒载体构建成功.用此重组质粒转染BHK-21细胞后并对其表达情况进行检测,表明该双表达质粒在BHK-21细胞中能够成功表达.以此重组质粒免疫乳鼠后12 h,按100 TCID50/O.1 mL的量进行攻毒,结果发现该质粒能够抑制病毒的增殖,对乳鼠有一定的保护作用.结果表明成功构建了牛α-IFN及FMDV P12A3C组合基因双表达载体,为进一步研究口蹄疫基因疫苗提供前期基础.